问：为什么骨、牙齿和钙化组织做病理需要"等一等"？

答：平时我们遇到的软组织，经过固定、取材、脱水、包埋后，就能在切片机上切出薄薄的切片。但骨头、牙齿，或者长了钙化灶的组织却不行——这是很多患者和家属好奇的地方。

问：原因很简单：它们"太硬了"。

答：如果不做特殊处理，切片机根本切不动，不仅会把珍贵的组织样本切成碎渣，显微镜下看不清结构，还可能崩坏刀片、损伤设备。所以，病理科需要先做一步关键处理，叫"脱钙"。

问：那什么是脱钙呢？

答：您可以把它想象成"白醋泡软骨头"——咱们平时炖骨头汤，加点醋能让骨头里的钙质溶出来，骨头也就变软了。病理科的脱钙原理与此类似，只是方法更专业、浓度和时间把控更精准：我们用特定的脱钙液，把组织里的钙盐温和地"请"出去，让坚硬的骨组织变得柔软适中，这样才能切出完整、薄而透亮的切片，供病理医生在显微镜下看清每一个细胞细节。

问：所以报告为什么要延迟？

答：因为脱钙这一步需要时间。根据组织大小、钙化程度的不同，短则一两天，长则需要数天。脱钙不足，切出来的片子是碎的；脱钙过度，细胞形态又会受影响。病理医生必须等到"火候刚好"，才能动手切片、染色、诊断。

多等这几天，换来的是更准确的诊断。

敲重点

不过脱钙也是很有讲究的，咱们也不能将骨、牙齿和含有钙化的组织直接扔进脱钙液里，

问：脱钙前的基础要求有哪些？

答：

●骨、牙齿和含有钙化组织需在充分固定后再开展脱钙处理；

●完整的牙齿与骨组织可先锯开，再用砂轮磨成薄片后脱钙；

●脱钙组织厚度适中，不宜超过4mm，不然外软里硬的，导致脱钙不均匀；

●局部钙化的组织，脱钙浸泡时长可相应缩短。

 问：常用脱钙方法有哪些？

答：通常有以下几种方法

（一）、酸性溶液脱钙法

这是病理科最常用的脱钙方式，依靠酸性溶液溶解钙质，脱钙效率较高，包含以下两种经典方法。

1. 硝酸脱钙法

常用硝酸脱钙液两种配制方法：

① 10%硝酸水溶液，可加入少量尿素；

② 硝酸10ml与10%甲醛90ml的混合液。

操作流程：组织经甲醛固定后，可先用5%硝酸溶液进行脱钙。

2. 盐酸脱钙法

常用盐酸脱钙液两种配制方法：

① 盐酸8.5ml、甲酸5ml、氯化铝7g，加蒸馏水至100ml；

② 盐酸和甲酸各20ml，加蒸馏水至100ml。

操作流程：与硝酸脱钙法一致。

●优点: 速度快,大部分病理科普通骨组织标本都用它。

●缺点: 时间必须卡准,泡短了钙没去干净切不动，泡久了会损伤细胞，看不清病变结构，

同时也影响染色。

（二）电解脱钙法

电解脱钙依靠电场作用加速钙离子析出，提升脱钙速率。

1. 电解液配制方法（总量1000ml）：25%盐酸50ml + 25%甲酸200ml + 蒸馏水750ml；

2. 操作流程：选用玻璃缸或大烧杯作为电解槽，加入配制好的电解液即可开展电解脱钙。

●优点：脱钙速度、对组织的温和度，在酸性脱钙和温和脱钙之间。

●缺点：需要专门的电解槽设备,普通用得不算多。

（三）螯合剂脱钙法

该方法对组织无损伤，但脱钙速度较慢。它能保留组织内酶的活性，可用于组织化学染色的小块骨组织。对组织抗原性的损伤也较小，因此用于用于免疫组化较为理想，骨组织超薄切片在预固定后常用EDTA（乙二胺四乙酸）溶液脱钙处理。

1.  EDTA（乙二胺四乙酸）溶液配制方法：取EDTA 10g，溶解于磷酸盐缓冲液（PBS）或Tris缓冲液(pH 6.8~7.0)中，定容至100ml；

2.  操作流程：将薄片组织放入EDTA溶液中脱钙，每4天更换一次新液，全程需数周才能脱钙完毕；

3.  收尾处理：脱钙完成后，经流水冲洗去除组织内残留的EDTA，再按常规流程处理标本。

●优点: 保护细胞,适合要做精细检查的标本。

●缺点: 速度慢,常常要泡好几天,普通标本一般不用。

问：脱钙后的标准处理流程有哪些？

答：脱钙完成后，规范处理是保障制片质量的关键，核心步骤如下：

1. 冲洗中和：脱钙后的组织用流水冲洗15~30分钟，也可先用碳酸钠溶液中和残留酸性；

2. 修整组织块：修去锯面的薄层受损组织，切成大小适宜的组织块后进入常规制片流程。需注意脱钙组织脱水应充分，否则组织易发脆，导致切片困难。

测试脱钙是否完全小技巧：

1.  用针刺入组织无阻力感为止（晚各一次）。

2.  柔软性较好组织，用镊子可弯曲120°而回弹，说明脱钙完全。如不够，可适当延长脱钙时间。

3.  对脱钙液进行钙盐试验以确定脱钙是否完全，可取用过的脱钙液5ml，加浓氨水1ml，充分混合后，加草酸铵饱和水溶液0.1ml，若有沉淀生成，说明脱钙还不充分，若液体透明，说明已完全脱钙。 

脱钙后骨组织镜下形态：

脱钙只是病理制片中的一个小环节而已，方法有很多：酸性溶液脱钙操作简便、效率较高，适合常规标本；电解脱钙速度更快，可满足加急标本需求；螯合剂EDTA脱钙对组织形态、抗原与酶活性保护更佳，适合特殊检测需求的标本。各有各的优缺点，没有哪种方法是万能的，只有结合标本类型与诊断目标选择合适方法，配合标准化的前后处理，才能制备出一张合格且优质的骨组织病理切片。

作者：病理科 范仕艳